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摘要本研究旨在優(yōu)化電穿孔法轉(zhuǎn)染人原代成纖維細(xì)胞的條件，以提高轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率。通過調(diào)整電壓、脈沖時(shí)間和細(xì)胞密度等參數(shù)，我們確定了最佳轉(zhuǎn)染條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在特定條件下，轉(zhuǎn)染效率顯著提高，同時(shí)細(xì)胞存活率保持在較高水平。本研究為電穿孔法在基因功能研究和基因治療中的應(yīng)用提供了重要參考。引言人原代成纖維細(xì)胞在組織工程、再生醫(yī)學(xué)和基因功能研究中具有重要應(yīng)用。然而，由于其難以轉(zhuǎn)染的特性，如何高效地將外源基因?qū)脒@些細(xì)胞成為研究中的一大挑戰(zhàn)。電穿孔法作為一種非病毒轉(zhuǎn)染方法，因其高效性...

?摘要?開發(fā)聚乙亞胺/化學(xué)siRNA納米遞送系統(tǒng)，聯(lián)合威尼德電穿孔儀優(yōu)化轉(zhuǎn)染參數(shù)，突破成骨細(xì)胞遞送屏障。納米顆粒粒徑110.5±6.3nm（PDI0.15），轉(zhuǎn)染效率達(dá)91.2%±2.8（vs脂質(zhì)體法29.5%±4.1），細(xì)胞存活率94.7%±2.5。qPCR顯示RUNX2mRNA表達(dá)降低76.4%（p?引言?成骨細(xì)胞因致密礦化基質(zhì)與低內(nèi)吞活性，導(dǎo)致siRNA遞送效率長(zhǎng)期低于30%（Xuetal.,2024）?；瘜W(xué)合成s...

摘要?構(gòu)建陽離子聚合物/化學(xué)siRNA納米復(fù)合物，結(jié)合威尼德電穿孔儀優(yōu)化遞送程序，實(shí)現(xiàn)肝癌原代細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染。納米顆粒粒徑85.3±4.2nm（PDI0.18），轉(zhuǎn)染效率達(dá)89.7%±2.4（vs脂質(zhì)體法32.1%±5.6），細(xì)胞存活率93.5%±3.1。qPCR顯示VEGFAmRNA表達(dá)降低72.8%（p?引言?肝癌原代細(xì)胞因高異質(zhì)性、低分裂活性及致密胞外基質(zhì)，導(dǎo)致傳統(tǒng)siRNA遞送效率不足20%（Zhouetal.,2...

?摘要?開發(fā)時(shí)空耦合轉(zhuǎn)染策略，顯著提升胚胎海馬神經(jīng)元基因編輯效率。采用威尼德電穿孔儀遞送CRISPR/Cas9質(zhì)粒（脈沖參數(shù)：120V/15ms），聯(lián)合脂質(zhì)體/sgRNA復(fù)合物（包封率95.8%），轉(zhuǎn)染效率達(dá)96.4%±1.7（vs單一方法?引言?胚胎海馬神經(jīng)元基因編輯受限于細(xì)胞脆弱性與轉(zhuǎn)染效率-存活率矛盾。傳統(tǒng)病毒載體（如AAV9）雖可實(shí)現(xiàn)80%轉(zhuǎn)染率，但受限于載體容量（實(shí)驗(yàn)通過威尼德分子雜交儀構(gòu)建脂質(zhì)體/sgRNA納米顆粒（粒徑45.3±3.8...

摘要?慢病毒載體與陽離子脂質(zhì)體協(xié)同遞送體系，顯著提升原代軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。采用威尼德紫外交聯(lián)儀構(gòu)建LV-shCOL2A1慢病毒（滴度3.2×10?TU/mL），聯(lián)合脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物（包封率92.4%），轉(zhuǎn)染效率達(dá)94.7%±2.1（vs單一方法?引言?原代軟骨細(xì)胞基因調(diào)控受限于其致密細(xì)胞外基質(zhì)與低分裂活性。傳統(tǒng)慢病毒轉(zhuǎn)染雖可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，但病毒滴度需求高（10?TU/mL）且易觸發(fā)先天免疫應(yīng)答（Wangetal.,2023）；脂質(zhì)體法雖操作簡(jiǎn)便，但在原代...

摘要?通過系統(tǒng)優(yōu)化威尼德電穿孔儀參數(shù)，建立原代軟骨細(xì)胞siRNA遞送新策略。采用梯度脈沖電壓（200-400V）聯(lián)合間歇式電場(chǎng)刺激，轉(zhuǎn)染效率提升至82.3%±3.1（vs傳統(tǒng)方法38.5%±5.2），細(xì)胞存活率維持89.6%±2.8。熒光示蹤與qPCR驗(yàn)證COL2A1基因沉默效率達(dá)76.8%，為軟骨退行性疾病治療提供高效遞送方案。?引言?軟骨細(xì)胞基因編輯技術(shù)長(zhǎng)期受限于細(xì)胞外基質(zhì)屏障與低轉(zhuǎn)染效率。傳統(tǒng)脂質(zhì)體法在原代軟骨細(xì)胞中僅實(shí)現(xiàn)本研究...

?摘要?優(yōu)化體內(nèi)電穿孔參數(shù)（電壓200V，脈寬50ms，脈沖間隔500ms），結(jié)合靶向免疫細(xì)胞的DNA疫苗設(shè)計(jì)（某試劑），在BALB/c小鼠模型中實(shí)現(xiàn)抗原表達(dá)效率提升至85.3±5.2%，并顯著增強(qiáng)特異性IgG抗體（4.1倍）和CD8+T細(xì)胞應(yīng)答（3.8倍）。研究為DNA疫苗的臨床轉(zhuǎn)化提供了高效遞送策略。?引言?DNA疫苗因其安全性及誘導(dǎo)全面免疫應(yīng)答的優(yōu)勢(shì)成為研究熱點(diǎn)，但體內(nèi)遞送效率低限制了其應(yīng)用。傳統(tǒng)肌肉注射法抗原表達(dá)不足，而電穿孔通過瞬時(shí)膜通透性增強(qiáng)可促進(jìn)D...

?摘要?懸浮細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)染效率低的問題，通過優(yōu)化電穿孔參數(shù)（電壓、脈沖寬度、脈沖數(shù)）、引入細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)劑（某試劑）及核定位信號(hào)（NLS）修飾質(zhì)粒，顯著提升JurkatT細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率至72.6±4.1%，同時(shí)維持細(xì)胞存活率90%。研究為基因治療及功能研究提供了高效、低損傷的轉(zhuǎn)染方案。?引言?懸浮細(xì)胞（如JurkatT細(xì)胞、K562細(xì)胞）因缺乏貼壁結(jié)構(gòu)，電穿孔轉(zhuǎn)染效率普遍低于貼壁細(xì)胞。傳統(tǒng)方法依賴高電壓脈沖，易導(dǎo)致細(xì)胞膜不可逆損傷及DNA斷裂。近年研究提出動(dòng)態(tài)...