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摘要斑馬魚為模型，探索電穿孔技術(shù)對魚類尾鰭細胞及成熟配子的基因轉(zhuǎn)染效率優(yōu)化方法。通過威尼德電穿孔儀調(diào)控脈沖參數(shù)，結(jié)合某試劑預(yù)處理細胞，顯著提升了外源基因的導(dǎo)入效率。實驗表明，優(yōu)化后的轉(zhuǎn)染方案可實現(xiàn)尾鰭細胞轉(zhuǎn)染率65%，配子轉(zhuǎn)染率40%，為魚類基因編輯提供了高效技術(shù)支撐。引言魚類作為模式生物在發(fā)育生物學(xué)和遺傳學(xué)研究中具有重要地位，其尾鰭細胞因再生能力強、易獲取等特點，成為體外基因功能研究的理想材料。然而，傳統(tǒng)顯微注射法在配子轉(zhuǎn)染中存在效率低、操作復(fù)雜等問題，而電穿孔技術(shù)作為一種...
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摘要傳統(tǒng)離體神經(jīng)元轉(zhuǎn)染效率低、細胞損傷大的問題，開發(fā)了一種基于改良電穿孔技術(shù)的高效轉(zhuǎn)染方法。通過優(yōu)化電場參數(shù)與緩沖液體系，結(jié)合威尼德電穿孔儀與某試劑預(yù)處理，顯著提升了大鼠海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)染效率至85%以上，同時維持細胞存活率90%。該技術(shù)為神經(jīng)退行性疾病機制研究提供了可靠工具。引言海馬神經(jīng)元作為研究突觸可塑性與記憶機制的重要模型，其體外基因轉(zhuǎn)染效率直接影響功能研究的可靠性。傳統(tǒng)脂質(zhì)體法或病毒載體存在轉(zhuǎn)染率低（實驗部分1.材料與設(shè)備細胞來源：新生SD大鼠（出生24h內(nèi)）海馬組織分離...
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摘要優(yōu)化綿羊誘導(dǎo)多能干細胞（iPSC）的電穿孔轉(zhuǎn)染效率。通過系統(tǒng)調(diào)整電壓、脈沖時間及質(zhì)粒濃度，結(jié)合威尼德電穿孔儀的參數(shù)設(shè)置，篩選出轉(zhuǎn)染效率與細胞存活率的組合。實驗結(jié)果顯示，電壓300V、脈沖時長5ms、質(zhì)粒濃度2μg/μL時，轉(zhuǎn)染效率達68.2%，細胞存活率80%。本方案為綿羊iPSC基因編輯研究提供了可靠的技術(shù)支持。引言綿羊誘導(dǎo)多能干細胞在畜牧育種、疾病模型構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因動物開發(fā)中具有重要應(yīng)用價值。然而，其轉(zhuǎn)染效率受限于細胞膜通透性低及傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法（如脂質(zhì)體）的毒性問題。電穿...
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摘要探究丙型肝炎病毒（HCV）非結(jié)構(gòu)蛋白4B（NS4B）對宿主細胞基因表達的影響。通過構(gòu)建NS4B真核表達載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染Huh-7細胞，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)篩選差異表達基因（DEGs）。結(jié)果顯示，NS4B顯著調(diào)控細胞凋亡、免疫應(yīng)答及脂代謝相關(guān)通路。實驗揭示了NS4B在HCV致病機制中的潛在作用，為抗病毒靶點開發(fā)提供了理論依據(jù)。引言丙型肝炎病毒（HCV）感染是全球慢性肝病的主要病因之一，可導(dǎo)致肝硬化及肝癌。其非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B作為病毒復(fù)制復(fù)合體的核心組分，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)...
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摘要分子克隆技術(shù)構(gòu)建雞Bcl2基因的重組表達質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染雞原代成纖維細胞，探究Bcl2過表達對細胞凋亡的調(diào)控作用。實驗采用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率，Westernblot驗證Bcl2蛋白表達水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組細胞凋亡率顯著降低，表明Bcl2通過抑制凋亡關(guān)鍵通路發(fā)揮調(diào)控功能，為家禽抗病育種提供理論依據(jù)。引言Bcl2家族蛋白是細胞凋亡調(diào)控的核心因子，其中抗凋亡成員Bcl2通過抑制線粒體途徑的細胞色素C釋放，阻斷Caspase級聯(lián)反應(yīng)，從而維持細胞存活。在家禽疾...
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摘要基因表達譜芯片技術(shù)分析XTP4基因轉(zhuǎn)染細胞的差異表達基因，揭示XTP4在調(diào)控細胞增殖與凋亡中的潛在機制。實驗采用威尼德電穿孔儀進行細胞轉(zhuǎn)染，結(jié)合威尼德紫外交聯(lián)儀完成探針固定，篩選出顯著差異基因并進行功能驗證。結(jié)果表明，XTP4過表達可激活多條信號通路，為腫瘤靶向治療提供新靶點。引言XTP4基因作為近年來發(fā)現(xiàn)的調(diào)控因子，在細胞周期、代謝及腫瘤發(fā)生中具有重要作用，但其具體作用機制尚不明確?；虮磉_譜芯片技術(shù)因其高通量、高靈敏度的特點，已成為篩選差異基因的關(guān)鍵工具。本研究通過構(gòu)...
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摘要穩(wěn)定表達周期性馬來絲蟲基因的哺乳動物細胞系。通過分子克隆技術(shù)將目標基因插入表達載體，利用威尼德電穿孔儀進行細胞轉(zhuǎn)染，并通過藥物篩選及單克隆擴增獲得穩(wěn)定株。Westernblot與熒光定量PCR驗證基因表達，細胞功能分析表明轉(zhuǎn)染后周期相關(guān)蛋白表達顯著上調(diào)。該細胞系為絲蟲生命周期研究及抗寄生蟲藥物開發(fā)提供了可靠模型。引言馬來絲蟲（Brugiamalayi）是淋巴絲蟲病的主要病原體，其基因表達調(diào)控機制與宿主適應(yīng)性密切相關(guān)。周期型基因的表達模式在寄生蟲發(fā)育、免疫逃逸及傳播中起關(guān)鍵...
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摘要聚乙烯亞胺（PEI）作為非病毒基因載體，其轉(zhuǎn)染效率受多種因素影響。本研究通過系統(tǒng)分析PEI分子量、N/P比、細胞密度及培養(yǎng)時間對體外轉(zhuǎn)染效率的影響，結(jié)合熒光顯微鏡和流式細胞術(shù)評估綠色熒光蛋白（GFP）表達水平。結(jié)果表明，25kDaPEI在N/P比為8:1、細胞密度為60%時轉(zhuǎn)染效率高，且48小時培養(yǎng)后表達達峰值。本研究為優(yōu)化PEI介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染提供了實驗依據(jù)。引言聚乙烯亞胺（PEI）因其高陽離子電荷密度和“質(zhì)子海綿效應(yīng)”被廣泛應(yīng)用于體外基因轉(zhuǎn)染。然而，其轉(zhuǎn)染效率受制備條件...
