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摘要基因表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選XTP4基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的差異表達(dá)基因。采用威尼德電穿孔儀構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型，提取RNA后利用威尼德紫外交聯(lián)儀和分子雜交儀進(jìn)行芯片雜交及信號(hào)檢測(cè)。共鑒定出327個(gè)顯著差異表達(dá)基因，涉及代謝調(diào)控和細(xì)胞周期通路。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為解析XTP4的分子機(jī)制提供了新依據(jù)。引言XTP4基因作為一類新型調(diào)控因子，在細(xì)胞增殖與凋亡中發(fā)揮關(guān)鍵作用，但其具體分子機(jī)制尚未明確?；虮磉_(dá)譜芯片技術(shù)因其高通量、高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，已成為篩選差異表達(dá)基因的重要工具。目前，針對(duì)XTP4的轉(zhuǎn)染...

摘要PS1TP1基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中差異表達(dá)基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。通過威尼德電穿孔儀實(shí)現(xiàn)高效基因轉(zhuǎn)染，結(jié)合高精度分子雜交儀完成基因表達(dá)譜檢測(cè)，篩選出132個(gè)顯著差異表達(dá)基因（|log2FC|1，p引言PS1TP1基因作為新發(fā)現(xiàn)的腫瘤調(diào)控因子，其功能機(jī)制尚不明確。傳統(tǒng)研究依賴單一基因檢測(cè)或低通量技術(shù)，難以全面解析其下游網(wǎng)絡(luò)，且存在靈敏度低、重復(fù)性差等技術(shù)瓶頸。此外，現(xiàn)有轉(zhuǎn)染技術(shù)常因細(xì)胞損傷導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差，而雜交分析中非特異性結(jié)合問題亦影響結(jié)果可靠性。針對(duì)上述痛點(diǎn)，本研究提出兩大突破方向：1...

摘要CD59基因突變體在真核細(xì)胞中的功能性表達(dá)特性。通過定點(diǎn)突變技術(shù)構(gòu)建CD59突變體質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)及補(bǔ)體介導(dǎo)溶血實(shí)驗(yàn)分析其膜定位與抗補(bǔ)體活性。結(jié)果顯示，第40位半胱氨酸突變顯著降低蛋白穩(wěn)定性，而糖基化位點(diǎn)修飾未影響功能。本研究為CD59結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系提供新依據(jù)。引言CD59是一種廣泛表達(dá)的膜錨定補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，通過抑制補(bǔ)體末端復(fù)合物（MAC）形成保護(hù)宿主細(xì)胞免受溶破損傷。其功能依賴于保守的半胱氨酸殘基形成的二硫鍵及糖基化修飾。...

摘要一種基于銀粒特征分析的原位分子雜交圖像分割方法，通過優(yōu)化形態(tài)學(xué)操作與機(jī)器學(xué)習(xí)算法，提升銀粒檢測(cè)的準(zhǔn)確性與效率。實(shí)驗(yàn)采用威尼德原位雜交儀與紫外交聯(lián)儀完成樣本處理，結(jié)合某試劑進(jìn)行探針標(biāo)記。結(jié)果表明，該方法在復(fù)雜背景下的銀粒分割準(zhǔn)確率達(dá)95.6%，較傳統(tǒng)算法提升12.3%，為分子雜交定量分析提供了可靠技術(shù)方案。引言原位分子雜交技術(shù)是研究基因表達(dá)與定位的核心手段，其檢測(cè)精度依賴于銀粒信號(hào)的有效識(shí)別。傳統(tǒng)圖像分割方法受限于銀粒形態(tài)多樣性及背景噪聲干擾，易導(dǎo)致假陽性或漏檢。近年研究表...

摘要CD154基因真核表達(dá)載體，并探討其在食管癌Eca109細(xì)胞中的表達(dá)效果。通過PCR擴(kuò)增CD154基因編碼序列，經(jīng)雙酶切連接至某品牌真核表達(dá)載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染Eca109細(xì)胞。Westernblot及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中CD154蛋白顯著表達(dá)，且細(xì)胞表面分子CD40配體活性增強(qiáng)。結(jié)果表明，成功構(gòu)建的載體可有效介導(dǎo)CD154在Eca109細(xì)胞中的功能表達(dá)，為后續(xù)腫瘤免疫治療研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。引言CD154（又稱CD40配體）是腫瘤壞死因子超家族成員之一...

摘要HCVC區(qū)基因重組質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀將其轉(zhuǎn)染至真核細(xì)胞及小鼠漿細(xì)胞瘤模型，探討其表達(dá)調(diào)控機(jī)制。采用qRT-PCR、Westernblot及威尼德原位雜交儀分析基因表達(dá)水平。結(jié)果顯示，HCVC區(qū)在漿細(xì)胞瘤中表達(dá)顯著升高，提示其潛在致癌作用。HCV相關(guān)腫瘤機(jī)制提供新依據(jù)。引言丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝細(xì)胞癌的主要誘因之一，其核心蛋白（C區(qū)）在病毒復(fù)制及宿主免疫調(diào)控中起關(guān)鍵作用。近年研究表明，HCVC區(qū)基因可能通過調(diào)控宿主基因表達(dá)參與腫瘤發(fā)生，但其在真核細(xì)胞及漿細(xì)胞瘤...

摘要蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域（PTD）的跨膜遞送特性，開發(fā)了一種高效的大分子轉(zhuǎn)染技術(shù)。通過優(yōu)化PTD融合蛋白的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染條件，結(jié)合威尼德電穿孔儀與紫外交聯(lián)儀，實(shí)現(xiàn)了質(zhì)粒、蛋白質(zhì)及RNA等多種大分子在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的高效遞送。實(shí)驗(yàn)表明，該方法轉(zhuǎn)染效率達(dá)85%以上，細(xì)胞存活率高于90%，為基因治療及藥物開發(fā)提供了可靠工具。引言大分子（如質(zhì)粒DNA、蛋白質(zhì)、siRNA等）的高效遞送是基因功能研究及臨床治療的關(guān)鍵技術(shù)瓶頸。傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法（如脂質(zhì)體、病毒載體）存在效率低、細(xì)胞毒性高或免疫原性等問題。蛋...

摘要基于胺基化碳納米管（NH2-CNTs）的非病毒基因遞送系統(tǒng)，用于提高體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。通過化學(xué)修飾賦予CNTs表面正電荷，優(yōu)化其與質(zhì)粒DNA的結(jié)合能力，并利用威尼德電穿孔儀輔助轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NH2-CNTs/pDNA復(fù)合物在HEK293細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)82.3%的轉(zhuǎn)染效率，且細(xì)胞存活率高于85%。該體系為基因治療載體設(shè)計(jì)提供了新思路。引言基因遞送技術(shù)是基因治療與功能基因組研究的核心挑戰(zhàn)之一。傳統(tǒng)病毒載體雖高效，但存在免疫原性與插入突變風(fēng)險(xiǎn)；脂質(zhì)體及陽離子聚合物等非病毒載體...